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EZsep™ AFB&G免疫親和柱用于玉米中黃曲霉毒素B族的檢測(cè)

更新時(shí)間:2024-06-25       點(diǎn)擊次數(shù):1016

前言:

黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,簡(jiǎn)寫(xiě)為AFB1)是已知的化學(xué)物質(zhì)中致癌性非常強(qiáng)的一種,對(duì)人和動(dòng)物具有強(qiáng)烈的毒性,其毒性作用主要是對(duì)肝臟的損害。

黃曲霉毒素B1存在于土壤,動(dòng)植物各種堅(jiān)果,特別是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、調(diào)味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也經(jīng)常發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素。一般以熱帶和亞熱帶等南方高溫、高濕地區(qū)受污染最為嚴(yán)重,食品中黃曲霉毒素的檢出率比較高。黃曲霉毒素耐熱,280℃才可裂解,故一般烹調(diào)加工溫度下難以被破壞。國(guó)家質(zhì)檢總局規(guī)定黃曲霉毒素B1是大部分食品的必檢項(xiàng)目之一。

本文參考《GB 5009.22-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定 第三法為高效液相色譜-柱后衍生法》,利用EZsepTM AFB&G免疫親和柱(3mL,20/pk,貨號(hào):PZ24102)凈化樣品,再通過(guò)高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè),建立了一種玉米中黃曲霉毒素B族的分析方法。

 

關(guān)鍵詞:

黃曲霉毒素B族,免疫親和,高效液相色譜

 

1 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1.1 儀器與試劑

SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng),北京萊伯泰科儀器股份有限公司;

LC600二元高壓梯度高效液相色譜(北京萊伯泰科儀器股份有限公司)配光化學(xué)衍生器;

E.T.氮吹濃縮儀(貨號(hào):C020017),北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司

冷凍離心機(jī),GL-20G-Ⅱ,上海安亭科學(xué)儀器廠;

EZsepTM AFB&G免疫親和柱(3mL,20/pk,貨號(hào):PZ24102),北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司;

甲醇(色譜純),購(gòu)自賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司;

乙腈(色譜純),購(gòu)自賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司;

超純水;

0.1%吐溫-水:1mL的吐溫-20,加水定容至1L。

1.2 工作液配制

乙腈中4種黃曲霉毒素混標(biāo)儲(chǔ)備液:1.0μg/mL,壇墨質(zhì)檢 。

黃曲霉毒素混標(biāo)中間液:移取黃曲霉毒素混標(biāo)儲(chǔ)備液1mL,用甲醇稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為100ng/mL的中間液。

黃曲霉毒素混標(biāo)工作液:移取黃曲霉毒素混標(biāo)中間液1mL,用甲醇稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為10ng/mL的工作液。

分別移取100ng/mL黃曲霉毒素混標(biāo)中間液10μL、50μL、200μL、500μL、1 000μL至10 mL容量瓶中,用初始流動(dòng)相定容至刻度,得到濃度依次為0.1 ng/mL、0.5 ng/ml、2.0 ng/ml、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

 

1.3 實(shí)驗(yàn)部分

1.3.1 樣品制備

 稱(chēng)取5g玉米試樣(精確至0.01g)于50mL離心管中,加入20.0mL甲醇-水溶液(70+30),渦旋混勻,用均質(zhì)器10000r/min上下震蕩均質(zhì)3 min,在6000r/min下離心20min。準(zhǔn)確移取4mL上清液,加入46mL0.1%吐溫-,混勻,待凈化。

1.3.2 凈化與濃縮

將低溫保存的EZsepTM AFB&G免疫親和柱(3mL,20/pk,北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司,貨號(hào):PZ24102恢復(fù)至室溫,待免疫親和柱內(nèi)原有液體流盡后,移取上述凈化液上樣,上樣結(jié)束后20mL2淋洗萃取柱,之后在真空狀態(tài)下干燥1min,最后用2mL甲醇洗脫。洗脫液40下氮吹濃縮至近干,再用流動(dòng)相定容至1 mL,渦旋混勻,0.22μm濾膜過(guò)濾,待檢測(cè)

1.3.3 高效液相色譜檢測(cè)條件

色譜柱:Promosil C185μm,4.6*250mm

波長(zhǎng)激發(fā)波長(zhǎng)360nm,發(fā)射波長(zhǎng)440nm

流速1.0mL/min

40℃

進(jìn)樣量20μL

流動(dòng)相超純水:甲醇+乙腈(50+50)=68:32

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

 

1 標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜

 

2 加標(biāo)樣品色譜

 

3空白樣品色譜

3 結(jié)論 

本實(shí)驗(yàn)使用EZsepTM AFB&G免疫親和柱(3mL,20/pk,北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司,貨號(hào):PZ24102對(duì)玉米黃曲霉毒素B族進(jìn)行凈化后通過(guò)高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè),該方法的加標(biāo)回收率在81.1%~93.2%之間,RSD2.2%~2.7%之間?;厥章屎头€(wěn)定性滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)要求,說(shuō)明EZsepTM AFB&G免疫親和柱能很好的完成方法中的凈化工作,并且結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

4 參考文獻(xiàn)

[1] GB 5009.22-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定 第三法高效液相色譜-柱后衍生法


1  加標(biāo)回收率

基質(zhì)

黃曲霉毒素

添加量

μg/kg)

回收率(%)

平均值(%)

RSD(%)

玉米

B1

0.1

83.2

85.1

86.3

81.1

83.9

2.7

B2

0.1

91.8

90.9

93.2

88.5

91.1

2.2

 

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